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如何保存使用重组蛋白酶K的特殊性

 发布时间:2022-06-20 点击量:8
 重组蛋白酶K是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。在较广的pH范围内(pH4-12.5)均有活性,在尿素和SDS中也较为稳定,还具有降解天然蛋白质的能力。它应用很广泛,主要用在基因诊断试剂盒、基因组DNA提取试剂盒、RNA提取试剂盒中去除DNA和RNA制备中的核酸酶,也可以于提取组织中非蛋白成份降解含有蛋白质的杂质。譬如DNA疫苗和肝素的制备等。
 
值得注意的是,蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理,它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用,以增加探针与靶核酸结合的机会,提高杂交信号.但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时,都会对细胞的结构有一定的破坏,导致组织切片的脱落,细胞核的消失,从而影响杂交结果.EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用,解决上述出现的问题,并能达到理想的染色效果.
 
保存:保存在-20℃冰箱里,避免反复冻融,有效保证12月
 
孵育温度为55至65℃,理想孵育温度为58℃,孵育时间为15分钟至48小时;理想孵育时间为2小时。
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