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二硫苏糖醇DTT的主要应用举例

 发布时间:2021-05-14 点击量:30
   二硫苏糖醇DTT是有效的还原剂,以βB↓等晶体蛋白为作用目标,能够保护正常晶体蛋白所含的半胱氨酸等成分不受氧化修饰,减少其变性可能性;还能够使已发生聚集的晶体蛋白发生分子之间的二硫键解离,阻止晶体蛋白高分子聚合物的形成,进而阻止其晶体蛋白由水溶性变为水不溶性,亦即抑制了晶体的混浊乃至白内障的发生;与其他抗氧化、抗糖化、抗游离基等成分合用,能够发挥良性协同效应。白内障疾病已成为影响人口生活质量的重要致病原因,二硫苏糖醇药理作用较强,性质稳定,安全低毒,效果明显,为预防、诊断、检测、保护、治疗和研究白内障及其相关疾病提供了一种新的药物来源。
  二硫苏糖醇DTT与巯基乙醇作用相似,但刺激性气味要小很多,毒性也低很多,而效果相当的情况下,DTT的使用浓度比巯基乙醇低7倍,缺点是DTT价格略高一些。
  二硫苏糖醇DTT的应用说明:
  DTT是酶、抗体和生长因子研究领域重要的试剂,有机合成中重要的巯基基团保护试剂。可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。
  巯基化DNA末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体,大大降低了偶联反应实验(如DNA在生物感应器中的固定)的效率;在DNA溶液中加入DTT,反应一段时间后除去就可以降低DNA的二聚化。
  DTT对叠氮化合物的还原:
  蛋白质化学-高水平的重组蛋白表达通常会产生蛋白质聚集和包埋体积累。DTT在处理蛋白质二硫键时,是增加蛋白质聚集溶解度的关键因素。DTT裂解二硫键和保持相关的半胱氨酸处于还原状态,但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部的二硫键,此类还原常常需要先将蛋白质变性,如高温加热或加入变性剂增溶缓冲液,通常包括6 M盐酸胍或8 M尿素的变性剂,100 mM的Tris-HCl,10–100mM的DTT。普遍的蛋白复性方法是使用增溶缓冲液稀释,复性缓冲液的浓度最终取决于0-2 M盐酸胍或尿素,0-2mM DTT和10-100mM的Tris HCl。缓冲液的复性可用于谷胱甘肽、氧化型谷胱甘肽、磺基甜菜碱、环糊精、(+)-反式-1,2-双(巯基乙酰氨基)环己烷、3甲胺N-氧化物和其他蛋白质,例如分子伴侣或折叠酶。在一些大规模蛋白质折叠和纯化中,DTT还用于防止不良的氧化。
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