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通过5-氟尿嘧啶如何研究肿瘤细胞的迁移性

 发布时间:2021-07-09 点击量:133
   瘤组织的增殖失控、瘤细胞的分化异常、瘤细胞具有侵袭和转移的能力是恶性肿瘤基本的生物学特征,而侵袭和转移又是恶性肿瘤威胁患者健康乃至生命的主要原因。因此研究肿瘤侵袭和转移的规律及其发生机制,对恶性肿瘤的防治有重要意义。
  利用5-氟尿嘧啶溶液(1ug/ml)、PBS、DMEM培养液、0.25%胰酶、胎牛血清等试剂,通过肿瘤细胞在体外仍具有迁移的能力,借鉴体外细胞致伤愈合实验模型,利用细胞划痕法测定肿瘤细胞的运动特性。
  实验步骤如下:
  1.5-氟尿嘧啶溶液的配制
  精密称取10mg用灭菌蒸馏水溶解,定容于100ml容量瓶,精密移取1ml溶液,稀释至100ml,即得1ug/ml 5-氟尿嘧啶溶液。
  2.制备单层细胞
  将细胞密度为5-10×105个/mL的Hep G2细胞铺于24孔板(每孔500 uL)上,加入含10%胎牛血清的RMPI.1640培养液,培养16-24 h,使形成单层细胞。
  3.划痕
  以五氟尿嘧啶(5-Fu)为例,首先配制1μg/μL的母液,取45μL该母液用PBS稀释至1.1 mL,得到浓度为40μg/ML的5-Fu溶液。用10 uL移液枪枪头(或者无菌牙签)在单层细胞上呈“一”字划痕,用PBS清洗3次,然后加入上面配好的5-Fu溶液,平行两个样本,孵育24 h后换成含10%胎牛血清的RMPI.1640培养液,孵育24 h。
  4.观察并拍照
  吸去培养液,用PBS清洗3次后,在倒置荧光显微镜下观察并拍照。
  实验注意事项
  1.实验时应注意细胞生长状况,选择适当的细胞接种浓度。对不同的细胞要观察细胞的贴壁率等,确定实验时细胞的接种数量和培养时间,保证培养终止时密度适当。
  2.在用PBS缓冲液冲洗时,注意贴壁慢慢加入,以免冲散单层贴壁细胞,影响实验拍照结果。
  3.在药物的筛选过程中,其对细胞迁移能力的影响也是重要的一方面。实验设计过程中需要选择适当的阳性对照组和阴性对照组。
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